Guide-it™ Recombinant Cas9 (10 μg/μl)

Guide-it Recombinant Cas9（10 μg/μl）は、野生型Streptococcus pyogenes由来のCRISPR/Cas9ゲノム編集用の組換えCas9タンパク質溶液である。従来品（3 μg/μl）よりもCas9タンパク質濃度が高濃度となっており、sgRNAとの複合体（RNP）形成の際の操作性が向上している。
Cas9遺伝子を使用するベクター導入システムに比べ、遺伝子の残存によるCas9の継続的な発現がないため、オフターゲット効果を抑制できる。
また、タンパク質への転写・翻訳・発現の過程がなく、C末にNLS（核移行シグナル）が付加されているため、迅速かつ効率よく変異導入が行える。
sgRNAの調製にはGuide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit（製品コード 632635）もしくはGuide-it Complete sgRNA Screening System（製品コード 632636）の使用を推奨する。

3 μg/μl濃度のCas9タンパク質Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) （製品コード 632641／632640）はこちら

10 μg/μl（グリセロール濃度は50％）

－20℃

図1. hiPS細胞における遺伝子のノックアウトおよび他社Cas9との比較
Guide-it Recombinant Cas9とGuide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitを用いて作製したsgRNAをエレクトロポレーションで導入して、各ターゲット遺伝子のゲノム編集実験を行った。
変異導入効率の確認にはGuide-it Mutation Detection Kit（製品コード 631448）を使用し、各％は切断効率を示している。


図2. 人工多能性幹細胞におけるCD81遺伝子のノックアウト
人工多能性幹細胞株hiPSC-18とhiPSC-22にGuide-it Recombinant Cas9とGuide-it sgRNA In Vitro Transcription Kitを用いて作製したsgRNAをエレクトロポレーションで導入して、CD81遺伝子のノックアウトを実施した。
抗体染色後のFACSの結果より、エレクトロポレーション10日後のノックアウト効率はhiPS-18で91％、hiPSC-22で85％となり、非常に高い導入効率を示した。


図3. AAVS1およびCXCR4遺伝子の相同組換え（HDR）効率
Hind III切断サイトを含んだRepair OligoをAAVS1 geneに、また、Hind IIIおよびBamH I切断サイトを含んだRepair OligoをCXCR4 geneにノックインするため、本製品を使用してエレクトロポレーションでCD34^＋造血幹細胞への導入実験を行った。
細胞内の各ターゲット遺伝子をPCRで増幅し、各制限酵素で切断して挿入効率を確認した。
（CXCR4には編集前の野生型の遺伝子にBamH Iサイトが1ヵ所ある。）