ICELL8 シングルセル解析

シングルセルレベルでの遺伝子発現解析

特長

  • ICELL8 Chipに細胞を分注し、シングルセルを取得
  • 単一細胞のみを選択してmRNA解析（1,200～1,500個程度のプロファイルを一度に取得）
  • 多様な細胞サイズ（5～100 μm）に対応し、1 Chipあたり最大8サンプルまでの同時解析が可能

概要

シングルセル解析は、1細胞レベルでmRNA解析を行うことで、細胞集団の平均的な解析ではなく、個々の細胞の変化を動的に追い、システマチックな理解へ繋げることが可能になる技術です。
タカラバイオでは、調製した目的細胞をICELL8システムにてICELL8 Chipに分注し、シングルセルを取得、遺伝子発現解析に利用します。調製したシングルセルから、cDNAを合成し、次世代シーケンサーを用いて3’RNA-seq法にて網羅的な遺伝子発現プロファイルを取得します。

【シングルセルからのmRNA解析の流れ】



※ シングルセル化装置ICELL8 cx Single-Cell Systemの詳細はこちら

サービス内容

  • バルク細胞からのシングルセル単離
    バルク細胞＊1（細胞懸濁液）を懸濁調整後、ICELL8システムにより細胞をICELL8 Chipに分注します＊2。
    ＊1　ご提供いただく細胞、細胞の解離・剥離方法については事前にご相談ください。
    ＊2　事前にBlank Chipでのテストランを行います。


  • 細胞の選択、cDNA調製
    専用ソフトウェアを用いて、シングルセルのウェルを選択します。
    選択した細胞について、Chip上で、細胞を溶解後、逆転写反応およびPCR反応を行い、二本鎖cDNAを取得します。この際に細胞識別のバーコードWBC（Nano-well barcode or cell specific barcode）を付与します。

  • ライブラリー作製
    二本鎖cDNAを鋳型にし、PCR増幅を行いシーケンスに供するライブラリーの調製を行います。

  • 高速シーケンス解析
    調製したライブラリーから、次世代シーケンサーを用いて、WBC配列の取得および100塩基の遺伝子配列の取得を行います。得られたデータは、WBCに基づき細胞ごとの配列データに分類します。
    ※高速シーケンス（NGS）解析 単独の受託も承っております。詳細はこちら

  • 情報解析
    取得した配列データを参照ゲノム配列へマッピングし、適切なソフトウェアを用いて遺伝子発現定量解析を行います。得られた発現プロファイルにアノテーション情報を付与し、各種統計解析を行います。解析結果は、遺伝子の発現量をまとめたファイル、主成分分析（PCA）結果、t-SNE解析などをまとめて納品いたします。これらは、ビューワを用いて確認／閲覧できます。

    【情報解析例：t-SNE解析および変動遺伝子の検出】
    t-SNE解析および変動遺伝子の検出

    ヒトiPS細胞から心筋細胞へ分化誘導した過程（Day01、Day03、Day09 and Day21）について、t-SNE解析によりクラスタ間で発現変動が見られた遺伝子を検出できました。

    【ビューワ例：心筋特異的マーカーMYH6の発現変動の確認】
    心筋特異的マーカーMYH６の発現変動の確認

    心筋特異的なマーカーとして知られるMYH6の発現変動に関する結果の例です。ヒトiPS細胞から心筋細胞へ分化誘導した過程（Day01、Day03、Day09 and Day21）で、分化が進むにつれてMYH6の発現が亢進している様子や、より詳細なMYH6の発現分布をバイオリンプロットにより確認できました。

価格・納期

ご依頼の内容により異なりますので、お問い合わせください。

納品物

  • 作業報告書
  • シーケンスデータ一式
  • 発現情報データ、解析結果ビューワ

ご注文方法

以下のフォーマットにご記入のうえ、電子メールにてこちらへご送付下さい。

受入サンプル

  • 細胞
  • 参照配列情報など

詳細は別途お問い合わせください。

ご留意事項

・ ヒト生体試料の解析にあたり、個人情報に関わるサンプルは、お客様ご所属施設の倫理委員会等で遺伝子解析研究に用いられることの承認が得られており、かつお客様の元で匿名化されたものに限らせていただきます。
詳しくは、「ヒトゲノム・遺伝子解析受託サービスについて」をお読みください。
・ お客様よりご提供いただいたサンプル・情報および納品物の複製物は、別途期限を定めている場合を除き、業務終了後3ヵ月を経過すると順次廃棄いたします。ご了承ください。

Application

ICELL8® Single-Cell Systemを用いた細胞混合サンプルの解析
ICELL8® Single-Cell Systemを用いた神経分化細胞プロファイリング
ICELL8® Single-Cell Systemを用いたアストロサイト分注　（細胞サイズと分注バイアスの確認）

関連製品・受託

ICELL8® cx Single-Cell System
SMART-Seq® v4 Ultra® Low Input RNA Kit for Sequencing
T細胞レパトア解析（T細胞受容体多様性解析）
次世代シーケンス（NGS）解析受託

注意事項
  • 本受託サービスは、個別に合意した場合を除き、すべて研究目的として作業を行います。納品物を試験研究目的以外へご使用される場合、弊社では納品物に起因する損失・損害等については一切の責任を負いかねます。納品物によっては、その構成物（例えば、ベクター、蛍光色素など）の使用に制限がある場合がありますのでご注意ください。
  • 納品物に起因して、直接的もしくは間接的に発生したお客様の損害については、明らかに弊社の責に帰すべき事由による場合を除いて、弊社は一切その責任を負いません。
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