Vaccinia Capping Enzyme

Vaccinia Capping Enzyme（VCE）は、vacciniaウイルス由来のキャップ化酵素であり、RNA（5’-triphosphate RNA）の5’末端に7-methylguanylate cap構造（Cap 0）を付加します。真核生物においてキャップ構造は、mRNAの安定化、核外輸送、および翻訳において重要です。2つのサブユニット（D1およびD12）からなる本酵素は、3つの酵素活性（RNAトリホスファターゼ、グアニリルトランスフェラーゼ、およびグアニンメチルトランスフェラーゼ）を持ち、本製品に含まれる試薬（10× Capping Buffer、S-adenosylmethionine (SAM)、およびGTP）と共に用いることで、完全なCap 0構造を持つRNAをin vitroにおいて調製できます。
また、本酵素をmRNA Cap 2’-O-Methyltransferase（製品コード 2470A/B）と同時に用いることで、Cap-0 RNAの1番目のヌクレオチドの2’-O部位がメチル化されたCap 1構造を持つRNAをシングルステップ反応で調製することも可能です（使用例-2をご参照ください）。

Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μl)	500 U
10× Capping Buffer	100 μl
S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM)	100 µl
GTP (10 mM)	50 µl

－20℃

10 U/μl

Escherichia coli carrying plasmids containing the genes for vaccinia virus capping enzyme

質量：約98 kDaおよび33 kDa（ヘテロダイマー）

37℃において1時間に10 pmolの[α-32P]GTPをRNA転写物に取り込む酵素量を1 Uとする。

1×		Capping Buffer
1 μM		GTP
10 μCi/ml		[α-32P]GTP
0.67 mM		SAM
2.5 μg/50 μl		100 nt RNA

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

*1	使用するRNA（5’-triphosphate RNA）は5’末端が複雑な2次構造を取る場合に備え、反応前に熱変性する。 ＜熱変性＞ (1) 精製RNA 10 μgをRNase-free waterで15 μl（Cap-0 RNA調製）あるいは14 μl（Cap-1 RNA調製）に調製する。 (2) 65℃、5～10分で熱変性した後、5分氷冷する。
*2	SAMは不安定であるため、反応前に必要分を32 mMのストック溶液からRNase-free waterで希釈調製する。希釈液は反応まで氷上で保存する。
*3	必要に応じてスケールアップ可能。
*4	RNAの長さが200 nt以下である場合は、cap付加効率（およびメチル化効率）を上げるため反応時間を延長する（Cap-0 RNA調製：30分→1時間、Cap-1 RNA調製：1時間→2時間）。

注：	反応液中のRNAを安定的に保つため、RNase inhibitorが使用できます。使用する場合は、最終濃度が1 U/μlとなるように添加してください。