PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA), HQ

PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA), HQ（以下、PrimeCap T7 HQ）は、ヒトまたは動物由来原料、およびβラクタム系化合物を最終組成液に含まないHigh Quality（HQ）グレード製品（研究用）です。本製品は非臨床試験用の医薬品原薬の調製やGMPガイドラインに準拠する医薬品の製造プロセスの開発、また、RNA医薬開発等の基礎研究に利用可能な製品です。
品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）

本製品は、PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)（製品コード 2560A）と同等の性能を有しており、Capアナログ依存的RNA合成、低dsRNA（double-strand RNA）生成、および耐熱性（～52℃）の特長を併せ持つ、T7 RNA polymerase^＊1の改変体です。
本酵素とCleanCap Reagent AG（TriLink社）などのCapアナログを組み合わせてin vitro transcription (IVT)を行なうことで、免疫原性のあるdsRNAの生成を大幅に低減しつつ、高いキャッピング効率とmRNAの高収量を実現します。高品質なmRNAを大量に調製することが可能なため、本製品はワクチンなどのRNA医薬分野での研究開発に適しています。

＊1 T7 promoter配列を含む二本鎖DNAを鋳型、NTPを基質として、プロモーター下流の領域を転写し、in vitroで一本鎖RNAを合成する酵素

代表的なT7 promoter配列と転写開始点（CleanCap Reagent AGを使用する場合の注意点）

実施例1．FLuc mRNA（約1.9 kb）での合成収量（左図）および dsRNA生成の抑制効果

Positive Control Template (FLuc)^＊1を鋳型として、T7 RNA Polymerase ver.2.0（製品コード 2541A）と本製品を用いて、CleanCap Reagent AG使用時の標準的な20 μl反応系（使用例参照）にて、37℃でのIVT反応結果を比較したところ、mRNA合成収量を損なうことなく、dsRNAの生成を10％以下に抑えられることを確認した。
　＊1　Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（製品コード 6144）の構成品

実施例2．Capアナログ濃度の違いによるmRNA収量・キャッピング効率・タンパク質発現レベルもご覧ください。

＜医薬品原料開発＞
非臨床試験用mRNA原薬の調製
RNA医薬のプロセス開発

＜基礎研究＞

• Capアナログを使用したcapped mRNAの合成（共転写キャッピング）
• 酵素的キャッピングに使用するuncapped RNAの合成（注：RNA収量はCapアナログ使用時と比べ、5～30％減少する場合がある。）

本製品の最終組成液には、ヒトまたは動物由来成分、およびβラクタム系化合物は含まれません。

PrimeCap T7 RNA Polymerase, HQ (200 U/μl)　　　200,000 U
10× IVT Reaction Buffer, HQ　　　10 ml

－20℃

200 U/μl

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase variant

質量：　約99.8 kDa
補因子：　Mg^2＋

37℃において1時間に0.25 μgの1.9 kb FLuc RNAを生成する酵素量を1 Uとする。

1×		IVT Reaction Buffer, HQ
10 mM		ATP・CTP・GTP・UTP
0.9 μg/20 μl		リニア化FLucプラスミドDNA

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

37℃で1～2時間インキュベーションする。

＊1 修飾NTPを使用する場合は、対応するNTPを等量で置き換えてください。
＊2 CleanCap Reagent AG（TriLink社：Code. N-7113-1/5/10）