Lentiviral High Titer Packaging Mix with pLVSINシリーズ

• pLVSIN-CMV Neoのシーケンスデータ（fasta形式のテキストファイル）
• pLVSIN-CMV Hygのシーケンスデータ（fasta形式のテキストファイル）
• pLVSIN-CMV Purのシーケンスデータ（fasta形式のテキストファイル）
• pLVSIN-EF1α Neoのシーケンスデータ（fasta形式のテキストファイル）
• pLVSIN-EF1α Hygのシーケンスデータ（fasta形式のテキストファイル）
• pLVSIN-EF1α Purのシーケンスデータ（fasta形式のテキストファイル）

1. パッケージング細胞
   
   • Lenti-X 293T Cell Line（製品コード 632180）
     ウイルス生産に最適化されたHEK 293T由来細胞株であり、高いトランスフェクション効率を示す（Clontechniques , October 2008）。
2. 試薬類
   ・下記のうちいずれかのトランスフェクション試薬^＊1
   
   a．TransIT-293 Transfection Reagent（製品コード MIR2704）
   b．CalPhos Mammalian Transfection Kit（製品コード 631312）
   ・ pLVSIN-AcGFP1-N1 Vecter（ポジティブコントロール用：製品コード 6187）^＊2
   
   ＊1 aは安定して高力価のレンチウイルスを取得するのに適しており、 bは比較的安価にトランスフェクションを行うことができる。本製品を使用して高力価のレンチウイルスを取得するには TransIT-293 Transfection Reagentの使用を強く推奨する。

   ＊2 pLVSIN-AcGFP1-N1 Vecterは蛍光タンパク質であるAcGFP1を発現するレンチウイルスベクタープラスミド であり、トランスフェクション効率の確認や、調製したレンチウイルスの生物学的力価を確認するためのポジティブコントロールとして 使用するのに便利である。


3. 力価測定
   正確で再現性のある遺伝子導入のために、レンチウイルスストック液の力価測定を強く推奨する。Lenti-X qRT-PCR Titration Kit（製品コード 631235）は、qRT-PCRを利用した迅速・簡便な力価測定キットである（Clontechniques , January 2008; Quinn et al ., 1997）。本キットではインターカレーター法のリアルタイムPCRによりウイルスRNAゲノムの存在量（RNAタイター）を調べることで、ウイルスストック液の力価を約4時間で測定できる。Lenti-X p24 Rapid Titer Kit（製品コード 632200）では、ELISA法を用いてウイルス上清中のp24キャプシドタンパク質の量を測定する。測定したp24キャプシドタンパク質量はウイルス力価と相関する。
   また、Lenti-X GoStix（製品コード 631243/631244）を用いると、ウイルス上清20 μlを使用して最短30秒（～10分）でレンチウイルスp24を検出してウイルス力価を簡易判定できます。ウイルス上清を回収するか、まだ培養を続けるかを判断するために有用である。


4. 組換えレンチウイルスの精製
   ウイルスを精製することで、遺伝子導入実験に悪影響を及ぼすおそれがある細胞夾雑物を除去することができる。Lenti-X Maxi Purification Kit（製品コード 631233/631234）は、クルードな上清から高純度レンチウイルスを精製するためのキットで、自然落下カラムを用いたプロトコールにより、インタクトで機能的なレンチウイルスを簡単、迅速、高効率で得ることができる。


5. 組換えレンチウイルスの濃縮
   Lenti-X Concentrator（製品コード 631231/631232）を用いると、超遠心を行わずにウイルス力価を100倍まで濃縮できる。濃縮されたレンチウイルスを用いることで高いMOIで標的細胞に感染できる。
   


6. 組換えレンチウイルスの感染効率アップ
   RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment)（製品コード T100A/B）は組換えフィブロネクチン断片（CH-296）で、レトロウイルスやレンチウイルスによる遺伝子導入効率を大きく向上させることができる（Clontechniques , October 2008）。RetroNectinは、組織培養プレート（ノントリートメント）にコーティングすることで、ウイルスと細胞の両方が結合する基質（substratum）となる。この基質にウイルスと細胞が同時に接着することにより、細胞とウイルスの接触が増大し、遺伝子導入が促進される。RetroNectinは、特に浮遊細胞（リンパ球やリンパ球細胞株など）や遺伝子導入が困難な細胞（造血幹細胞など）、あるいはポリブレンに特に弱い細胞に有用である。

• 本製品の使用には遺伝子工学と細胞培養に関する基本的な技術が必要です。
• 本製品の使用には文部科学省の定める省令（「研究開発等に係る遺伝子組換え生物等の第二種使用等に当たって執るべき拡散防止措置等を定める省令」平成16年文部科学省・環境省令第1号）にあるP2レベル以上の施設が必要です。（→説明書の「バイオセーフティーについて」を参照してください。）
• 本レンチウイルスベクターの系によって生産されるウイルス上清は、挿入断片によっては危険なウイルスを含む恐れがあるため、組換えレンチウイルスの生産と取扱いには、適切な処置をとる必要があります。吸入や付着を防ぐため、必ず、安全キャビネットを使用してください。
• 本製品の使用はすべて研究用に限定されています。臨床目的での使用および生体外診断に使用することはできません。
• 本製品ご利用の際は省令および組織内の組換えDNA安全委員会の指示に従い、安全には十分ご注意下さい。
• 本製品の使用によって生じたいかなる事故、損害についても、弊社では責任を負いかねますので、ご了承の上ご使用下さい。
• タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
• ライセンスに関する情報は製品名横のライセンスアイコンからご覧ください。
• RetroNectinはタカラバイオ株式会社の、In-FusionはTakara Bio USA, Inc.の登録商標です。Lenti-X、CalPhos、GoStixはTakara Bio USA, Inc.の商標です。その他、会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。

ぱっとわかる！ウイルスベクター選択ガイド

遺伝子導入試薬 選択ガイド（Mirus社）