mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase, HQ

mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase（2’-O-MTase）, HQは、ヒトまたは動物由来原料、およびβラクタム系化合物を最終組成液に含まないHigh Quality（HQ）グレード製品（研究用）です。本製品は非臨床試験用の医薬品原薬の調製やGMPガイドラインに準拠する医薬品の製造プロセスの開発、また、RNA医薬開発等の基礎研究に利用可能な製品です。
品質グレードとは？（RUO/HQ/GMP）

本製品は、mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase（2’-O-MTase）（製品コード 2470A/B）と同等の性能を有しており、5’ 末端に7-methylguanylate cap構造（Cap-0）を持つRNAの1番目のヌクレオチドの2’-O部位を特異的にメチル化し、Cap-1構造を付与します。Cap-1構造を持つRNAは、生体内において自然免疫応答を回避するのに役立ち、翻訳を促進することが知られています。
本酵素は添付のキャップ付加バッファー下において、S-adenosylmethionine（SAM）と共に使用することで、高効率にCap-0 RNAからCap-1 RNAを調製できます。
また、本酵素をFaustovirus Capping Enzyme (S17), HQ（製品コード 2481A）と同時に用いることで、キャップ化されていないRNA（5’-triphosphate RNA）からCap-1構造を持つRNAを直接、シングルステップ反応で調製することもできます。（使用例-2をご参照ください）

＜医薬品原料開発＞
非臨床試験用mRNA原薬の調製
RNA医薬のプロセス開発

＜基礎研究＞
m⁷G cap構造（Cap-0）RNAのCap-1構造への変換
VCE/FCE併用によりRNA（5’-triphosphate RNA）へのCap-1構造付与

本製品の最終組成液には、ヒトまたは動物由来成分、およびβラクタム系化合物は含まれません。

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase, HQ (50 U/μl)　　50,000 U
10× Capping Buffer 2, HQ　　10 ml
※本製品にはS-adenosylmethionine（SAM）が含まれません。別途ご用意ください。

－20℃

50 U/μl

Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for vaccinia virus mRNA cap 2’-O-methyltransferase

質量：約35.7 kDa

37℃において30分間に7 pmolのCap-0 RNAをメチル化する酵素量を1 Uとする。

1×		Capping Buffer 2, HQ
20 μM		SAM
1 μg/20 μl		100 nt Cap-0 RNA

性能試験結果については、各ロットのCertificate of Analysis（CoA）をご覧ください。CoAはhttps://catalog.takara-bio.co.jp/search/doc_index.phpからダウンロードできます。

使用例-1: （Cap-0 RNAからCap-1 RNAの調製）［2-step reaction］


使用例-2:（Uncapped RNA（5’-triphosphate RNA）からCap-1 RNAの調製）［1-step reaction］
*1 RNA（5’-triphosphate RNA）の5’ 末端が複雑な2次構造を取る場合は、反応前に熱変性することによりキャップ付加効率およびメチル化効率が改善される可能性がある。
（1）精製RNA 50 μgをRNase-free Waterで40 μl（Cap-0 RNAからのCap-1調製）あるいは34 μl（Uncapped RNAからのCap-1調製）に調製する。
（2）65℃ 5～10分で熱変性した後、5分氷冷する。
*2 SAMは不安定であるため、反応前に必要分を32 mMのストック溶液からRNase-free Waterで希釈調製する。希釈液は反応まで氷上で保存する。
*3 RNAのキャップ付加効率、あるいはメチル化効率が低い場合は、酵素の使用量を増やす、または反応時間を延長する。
*4 反応ボリュームは必要に応じてスケールアップ可能。